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                植物原生质体分离用到的那些酶
                植物原生质体分离原理

                植物原生质体是除去细胞壁⌒后为原生质所包围的“裸露细胞”,是开展基础研究的理想材料,在植物遗传工程和育种研究上具有广阔的应用前景。

                酶解法分离原生质体是一个常用的技术,其原理是☆植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质组成,因而使用纤维素ζ酶、半纤维素酶№和果胶酶能降解细胞壁成分,除去细胞壁,即可得到』原生质体。

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                植物原生质体○分离方法

                植物原生质体分离的方法分为机械分离法︾和酶解分离法。

                机械分离法:先将细胞放在高渗糖溶液中预处理,待细胞发生轻微质壁分离,原生质体收缩成球形后,再用机械法△磨碎组织,从伤口处可释放出完整的原生质体。

                用机械法分离细胞的明显优点是细胞不会受到酶的伤害,有利◆于开展生理生化研究。一般只用于薄壁组织排列松散、细胞间接触点很少的叶肉细胞,产量低,不易获得大量活性细胞。

                酶解分离法:指将材料放入能降解细胞壁的混合等渗酶液中保温一定时间,在酶液的作用下,细胞壁被降解,从而获得大量有活力的原生质体的方法。

                常用的酶种类:纤维素酶类(纤维素酶cellulase、半纤维素酶hemicellulase、崩溃酶driselase)、果胶酶类(果胶酶pectinase和离析酶macerozyme)、蜗牛酶snailase、胼胝质酶callosease等。

                草本植物体细胞分离原生质体

                利用纤维素酶类和果胶酶类中的2-3种酶组合成的混合酶液即可达到原生质体分离的目的,纤维素酶浓度一般为0.5%-3%,果胶酶浓度为0.1%-1%(见下表)。

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                木本植物体细胞分离原生质体

                由于细胞壁的构成与草本植物有所不同,因此其混合酶液的组成和浓度与草本植物有差异。分解木本植物细胞壁,纤维素酶是不可缺少的,其浓度范围与▂草本植物相同,但果胶酶的使用比草本植物更普遍(见下表)。

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                由于原生质体内々部与外界环境之间仅隔一层薄薄的细胞膜,必须保持在渗透压平衡的溶液中才能保持其完整性。其次,还应当考虑取材、酶的种类和纯度、酶液的渗透压、酶解时间及温度等因素对分离原生质体的影响。

                从理论上讲,植物体的任何一部分都可以通过酶解作用去除细胞壁而得到原生质╱体。但∞在实际操作中,只有幼嫩的组织才能完成去壁的过程。所以,为了制备健康的原生质体,一般选用根尖、茎尖、嫩叶及对数生长期的愈伤组织为材料,一旦细胞具有木质化或次生加厚的外壁,则不能被酶降解。


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